鸭血中鸭鸡鹅源性成分的测定（BJS 202309）解读

2023-09-01 09:55:50 来源：中国市场监管报收藏

(资料图)

动物源性食品掺假是当前社会关注的重要食品安全问题之一。动物血制品是我国常见食品原料，其中鸭血以营养丰富、口感细腻著称，价格远超鸡血等同类食品。由于难以通过外观来区分鸭血和其他动物血制品，这给不法商贩提供了可乘之机。部分商贩利用鸡、鹅等其他动物血冒充鸭血在市场上销售，严重侵害了消费者权益。现有的动物源性鉴别标准都只能完成定性测定，即判定样品中是否含有某一种动物源性成分，无法对其进行定量，也就不能区分混入的掺假成分是加工中无意污染还是故意添加，从而导致不能有效甄别是否存在掺假行为。研制背景液滴数字PCR检测（Dropletdigital PCR, ddPCR）是一种新型的核酸分子定量检测技术。ddPCR在PCR反应前将含有模板DNA的反应体系微滴化，把模板DNA分子分散在大约20000个微滴中，使大部分微滴中只含有1个DNA分子数，PCR扩增后读取荧光信号，依据泊松分布原理计算出体系中加入的模板DNA分子数，可实现对DNA拷贝数的定量分析。由于ddPCR技术可高度灵敏和准确地对核酸的拷贝数进行绝对定量，近年来已广泛用于致病菌检测、转基因食品检测和食品中动物源性掺假鉴定等领域。　　鉴于以上情况，本补充检验方法采用液滴数字PCR技术，适用于定量检测鸭血中的鸡鸭鹅源性成分含量。方法原理复制蛋白A1（RPA1）基因是动物细胞核基因组中的单拷贝基因，即一个细胞中只存在一个RPA1基因。在单位质量的动物源性食品中，RPA1基因数量是固定的，通过检测样品中鸡鸭鹅源性RPA1基因的数量就可计算出鸡鸭鹅源性成分的比例。　　本方法将样品进行干燥等前处理后，提取基因组DNA，以RPA1为靶基因，利用特异性引物和探针进行双重液滴数字PCR扩增，检测出试样中鸭和鸡（或鹅）源性成分的靶基因拷贝数。通过建立鸭和鸡（或鹅）之间靶基因拷贝数比与质量比的标准曲线，实现鸭血中鸭、鸡、鹅源性成分的定量检测。操作重点、难点及注意事项样品DNA提取是影响实验结果的关键步骤，要将待检测样品和绘制标准曲线用样品采用相同方法同一批次提取DNA，保证样品DNA提取效率相同。每次实验均需重新绘制标准曲线，不得重复使用。　　液滴数字PCR体系分割过程中产生的有效微滴数受实验操作及环境温湿度影响较大，产生的有效微滴数低于仪器理论数的60%时会导致结果计算不准确，实验中发现有效微滴数异常应重新进行实验。为保证实验结果准确，区分阴性微滴和阳性微滴的阈值线应尽可能贴近阴性液滴的区域，同一批样品（包括阳性对照、阴性对照）设定的阈值线也要保持一致。　　检测过程中要严格按照GB/T 27403中的规定执行，防止PCR扩增产物形成气溶胶，导致样品交叉污染，影响实验结果的准确。

□南京市食品药品监督检验院程逸宇

关键词：